什么时候微信上还能玩足彩:金花茶種子對激素相關性腫瘤體外抑制作用的實驗研究

2016-04-19 18:07 
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什么彩票用微信支付 www.ihohs.icu 來源:233網校論文中心[ 2010-08-27 10:20:00 ]閱讀:42編輯:studa20

              作者:韓立春,史麗穎, 于大永, 唐前, 唐玲, 馮寶民, 王永奇

【摘要】  目的觀察金花茶種子不同提取物對激素相關性腫瘤體外抑制作用。方法采用噻唑藍比色法(MTT)檢測金花茶種子不同提取物對人宮頸癌HeLa S3細胞和人前列腺癌PC3 細胞增殖的影響。結果金花茶種子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都顯示了較強的抑制人宮頸癌HeLa S3細胞和人前列腺癌PC3 細胞增殖的作用,其IC50分別為85.88,67.62,55.71 μg/ml和63.06,56.20,68.53 μg/ml,且抑制作用和樣品濃度呈量效關系。結論金花茶種子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分在體外對激素相關性腫瘤具有抑制作用,為其抗癌活性的有效部位。

【關鍵詞】  金花茶; 宮頸癌; 前列腺癌; HeLa S3細胞; PC3細胞

  Abstract:ObjectiveTo investigate the inhibitive effect of the seeds of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama on Gonadal Hormones dependent tumour in vitro. MethodsHeLa S3 cells were cultivated in RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum, PC3 cells were cultivated in DMEM medium containing 10% fetal calf serum. The anti-proliferative effect of the seeds of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama on HeLa S3 cells and PC3 cells were analyzed by MTT assay. ResultsEtOH extract, BuOH fraction and H2O fraction from the EtOH extract from the seeds of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama could significantly inhibit the proliferation of HeLa S3 cells and PC3 cells at IC50 concentration of 85.88, 67.62, 55.71 μg/ml and 63.06, 56.20, 68.53 μg/ml, respectively and a dose-dependent relationship between inhibitive ability and sample concentration. ConclusionBuOH fraction and H2O fraction from the EtOH extract from the seeds of Camellia chrysantha (Hu) Tuyama are effective for anticancer.

  Key words:Camellia chrysantha (Hu) Tuyama;  Cervical cancer;  Prostatic cancer;  HeLa S3 cells;  PC3 cells

   金花茶Camellia chrysantha (Hu) Tuyama系山茶科Theaceae山茶屬Camellia Linn.金花茶組Section chrysantha Chang植物,被列為國家一級、世界二級珍稀?;ぶ參錚?]。金花茶不僅有較高的觀賞價值,而且具有一定的藥用價值和營養價值。其葉和花為壯族民間用藥,主要用于治療咽喉炎、痢疾、高血壓病、便血、月經不調[2,3]。金花茶葉是一種含有豐富營養成分的山茶,含有多種微量元素和氨基酸,而咖啡堿含量低[4]。我們在對山茶屬植物抗腫瘤活性的研究中發現,金花茶種子的乙醇提取物具有較強的抗腫瘤作用。本研究將通過考察金花茶種子乙醇提取物不同萃取部位對人宮頸癌HeLa S3細胞和人前列腺癌PC3 細胞增殖的影響,探討其抗癌活性的有效部位及量效關系。

 1  材料與方法

  1.1  金花茶的提取分離金花茶種子采集于廣西南寧,由廣西林業科學研究院高級工程師梁盛業鑒定。取金花茶種子100 g,粉碎后用95%乙醇回流提取3次,3 h/次,合并提取液,減壓濃縮成浸膏,加適量水分散,依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取,各萃取液分別濃縮至浸膏,得醋酸乙酯部分、正丁醇部分和水溶部分,減壓濃縮并真空干燥后得到各部分的浸膏,各浸膏用DMSO配成各濃度溶液備用。

  1.2  細胞系和培養液人宮頸癌HeLa S3細胞株和人前列腺癌PC3 細胞株從Human Sciences Research Resource Bank (日本人類科學基金會, 東京, 日本) 獲得,HeLa S3細胞培養于含有10%熱滅活小牛血清的RPMI 1640培養液中,PC3細胞培養于含有10%熱滅活小牛血清的DMEM培養液中,37℃,5% CO2,飽和濕度條件下培養。選取對數生長期細胞進行實驗。

  1.3  體外細胞增殖抑制實驗噻唑藍比色法 (MTT) 檢測細胞生長情況,將HeLa S3細胞和PC3 細胞分別種于96孔培養板,每個孔細胞數為5×103,分別培養于RPMI 1640培養液和DMEM培養液中,在37℃,5% CO2條件下培養24 h。培養24 h后,以PBS沖洗細胞,然后分別加入新的培養液和系列濃度的待測樣品。經初步篩選后確定實驗組設6個藥物濃度組,每組藥物的終濃度分別為5,10,20,40,80,160 μg/ml,對照組加入同樣濃度的二甲基亞砜(DMSO),培養24 h。培養結束前4 h每孔加入20 ml MTT溶液(5 mg/ml),離心,棄上清液,加入200 ml DMSO充分溶解結晶物,酶標儀測490 nm處吸光度值。因為吸光度值與培養液中活細胞數成正比,所以通過吸光度值可以計算細胞存活百分率。

  1.4  統計分析以對照組中細胞存活率為100%,樣品組與其相比所得相對值為細胞存活百分率,實驗結果以±s表示,采用統計學t檢驗進行組間比較分析,P< 0.05為差異有顯著性。

2  結果
 
  用濃度分別為5,10,20,40,80,160 μg/ml的金花茶種子的不同提取物處理HeLa S3細胞和PC3 細胞,觀察不同濃度的樣品對HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的影響。結果發現金花茶種子乙醇提取物、正丁醇部分和水溶部分都顯示了較強的抑制HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的作用(見表1),其IC50分別為85.88,67.62,55.71 μg/ml和63.06,56.20,68.53 μg/ml。其中,正丁醇部分和水溶部分的高濃度組(160 μg/ml)對HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的抑制率均達60%以上,且抑制率隨樣品濃度的加大而增加(各濃度組與對照組相比差異有統計學意義,P<0.01),呈現出劑量效應關系。 表1  金花茶各提取物對HeLa S3細胞和PC3細胞增殖的影響(略)

3  討論

   我們采用重組人雌(孕)激素受體基因酵母法對金花茶種子乙醇提取物進行了雌(孕)激素活性試驗,證明它們都具有明顯的雌(孕)激素活性,同時又有較強的抗雌(孕)激素活性,對雌(孕)激素受體具有雙向調節作用,是一種非常理想的選擇性雌(孕)激素調節劑[5,6],引發我們對其抗激素相關性腫瘤(Gonadal Hormones Dependent Tumour, GHDT)的研究。因為具有雌激素樣作用的藥物能直接作用于雌激素受體,通過影響激素平衡來抑制某些激素相關性腫瘤。

   我們首先考察了金花茶不同植物部位抑制HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的活性,在金花茶種子乙醇提取物、花蕾乙醇提取物、葉乙醇提物和葉水提取物中,金花茶種子乙醇提取物顯示了較強的抑制HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的活性,為了確定其抗癌活性的有效部位,我們考察了金花茶種子乙醇提取物不同萃取部位對HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的影響,結果表明金花茶種子乙醇提取物的正丁醇部分和水溶部分具有較強的抑制HeLa S3細胞和PC3 細胞增殖的活性,初步確定為抗癌活性的有效部位。對有效部位化學成分的定量分析結果表明,正丁醇部分含總皂苷19.08%,總多酚6.92%,總黃酮5.36%,水溶部分含總皂苷17.36%,總多酚5.15%,總黃酮1.66%,其中哪些成分是抗癌活性的物質基礎及其作用機理還有待進一步研究。

參考文獻
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 ?。?]黃燮才.金花茶開發利用概況及前景預測[J].中國中醫藥信息雜志, 1994, 1 (6): 10.

 ?。?]王永奇, 吳小娟, 李紅冰, 等.藥用山茶屬植物的研究[J].大連大學學報, 2006, 27 (4): 47.

 ?。?]韋 霄, 蔣水元, 蔣運生, 等.珍稀瀕危植物金花茶研究進展[J].福建林業科技, 2006, 33 (3): 169.

 ?。?]吳小娟, 李 劍, 劉 蕓,等.重組雌激素受體基金酵母法對山茶子抗骨質疏松活性部位的研究[J].遼寧中醫藥雜志,2008,35(7):126.

 ?。?]吳小娟, 李 劍,劉 蕓,等.重組雌激素受體基金酵母法對山茶子拮抗孕激素作用的研究[J].時珍國醫國藥,2008, 19(8):1817.


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