微信对接彩票平台:金花茶組植物化學成分的定量分析

2016-04-19 18:06 

什么彩票用微信支付 www.ihohs.icu 來源:233網校論文中心[ 2009-08-31 14:43:00 ]閱讀:79編輯:studa20

         作者:唐前 羅燕英 黃連冬 陸敏珠 唐玲 史麗穎 馮寶民 王永奇    

【摘要】  目的測定金花茶、毛瓣金花茶、凹脈金花茶、四季金花茶、薄葉金花茶不同植物部位中總皂苷、總多酚(鞣質)、總黃酮的含量。方法采用紫外分光光度法。結果其總皂苷、總多酚(鞣質)、總黃酮的含量依次為:①金花茶花蕾醇提物:21.30%、6.56%(0.34%)、21.76%;葉子醇提物:43.24%、3.95%(1.57%)、0.93%;葉子水提物:9.91%、6.69%(1.34%)、5.19%;種子醇提物:13.53%、5.88%(0.83%)、6.85%。②毛瓣金花茶葉子醇提物:43.49%、6.79%(1.65%)、1.54%。③ 凹脈金花茶葉子醇提物:36.29%、13.19%(5.33%)、1.12%;種子醇提物:20.58%、5.29%(0.14%)、0.33%。④四季金花茶葉子醇提物:35.90%、7.01%(0.47%)、0.78%。⑤薄葉金花茶葉子醇提物:30.08%、7.57%(0.19%),0.82%。結論紫外分光光度法測定以上3種物質簡便易行,準確可靠,重復性和回收率都較理想。

【關鍵詞】  金花茶組植物 總皂苷 總多酚(鞣質) 總黃酮

   Abstract:ObjectiveTo determine the chemical constituents of total saponin, total polyphenol (tannin) and total flavonoids in Section Chrysantha Chang. MethodsTheir contents were determined by spectrophotometry.ResultsThe contents of total saponin,total polyphenol ( tannin) and total flavonoids were:①21.30%,6.56%(0.34%),21.76%; 43.24%,3.95%(1.57%),0.93%; 9.91%,6.69%(1.34%),5.19%; 13.53%,5.88%(0.83%),6.85%;②43.49%,6.79%(1.65%),1.54%;③36.29%,13.19%(5.33%),1.12%; 20.58%,5.29%(0.14%),0.33%;④35.90%,7.01%(0.47%),0.78%;⑤30.08%,7.57%(0.19%),0.82% respectively.ConclusionThe method is convenient and reliable to determine the three substances, and the reproducibility and the recovery are fairly good.

   Key words:Section Chrysantha Chang;  Total saponin;  Total polyphenol(tannin);  Total flavonoids

   20世紀60年代初,在我國廣西首次發現黃色山茶屬植物——金花茶Camellia chrysantha (Hu)Tuyama,震驚世界。到目前為止,已發現并命名的黃花山茶屬植物已達32種5變種,1998年張宏光教授將其歸類為金花茶組。其中除越南與廣西接壤的北部有3種,云南、貴州、四川各有1種外,其余26種、5變種均產于我國廣西南部和西南部的亞熱帶南緣和熱帶北緣地區。90%分布于中國,80%分布于廣西,說明中國是金花茶組植物的特產國,而廣西是金花茶組的特產區。

   但因為金花茶組植物發現較晚,加之分類上爭議時間較長,所以盡管在園林、花卉界轟動較大,亦被國家列為珍稀?;ぶ參?,但對它的現代研究甚少。本文以皂苷、多酚、黃酮類成分為指標,對其中產量大、資源較豐富的5種金花茶組植物化學成分進行了分析測定。現報道如下。

   1  儀器與試藥

   1.1  儀器Unico7200可見分光光度計(尤尼柯上海儀器有限公司); Laborata 4000 型旋轉蒸發儀( Heidolph 公司) ;BP210S 十萬分之一電子天平(Sartorius 公司) ; Jasco v﹣2560紫外可見分光光度計(JASCO 日本分光株式會社) 。

   1.2  試藥5種金華茶組植物均采集于廣西(由廣西林科院梁盛業鑒定,標本現存于大連大學藥物研究所);對照品由本實驗室提供; 蘆丁(東京化成工業株式會社, 純度98 %) ; 齊墩果酸( 中國藥品生物制品檢定所, 批號:1107092200304 , 純度98 %以上) ; 沒食子酸(中國藥品生物制品檢定所, 批號: 1205632200412 , 純度99.1 %) ; 所用試劑均為分析純; 實驗用水為蒸餾水。

   2  方法與結果

   2.1  總皂苷的含量測定[1]

   2.1.1  對照品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的齊墩果酸對照品25 mg , 置50 ml 容量瓶中, 加入甲醇溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 得0.5 mg·ml- 1的對照品溶液, 備用。

   2.1.2  供試品溶液的制備精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏A(g), 置100 ml 容量瓶中加入甲醇, 溶解并稀釋到刻度, 搖勻, 得B(mg·ml- 1)的溶液, 備用。

   2.1.3  測定波長的選擇齊墩果酸對照品溶液和供試品溶液香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色后, 在紫外可見分光光度計上, 波長400~800 nm 區間掃描。均在551 nm 處有最大吸收, 因此選擇551 nm為測定波長, 測得的結果以齊墩果酸為基準計算總皂苷的含量。

   2.1.4  線性關系考察精確吸取齊墩果酸標準溶液0.0,0.05,0.10,0.15,0.20 和0.25 ml 分置于具塞試管中,揮去甲醇, 精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液(新鮮配制)0.2 ml, 高氯酸0.8 ml , 搖勻, 于60 ℃水浴中加熱15 min后, 置冰浴中冷卻。加冰醋酸5 ml, 搖勻, 立即在551 nm波長下測定吸光度A, 同時以試劑空白作參照。以吸光度A為縱坐標, 體積V(ml  ) 為橫坐標, 繪制標準曲線。得回歸方程A=2.252V-0.0066(R2=0.999 4)。

   2.1.5  重復性實驗精確吸取C(ml)的供試品溶液, 置于具塞試管中, 揮去甲醇, 照標準曲線項下的方法操作, 平行做5 次實驗, 測定吸光度A, 代入回歸方程, 計算總皂苷的含量。A,B,C的數據見表1。結果見表2。表1  金花茶總皂苷的實驗數據表2  總皂苷含量測定結果%

   2.2  多元酚及鞣質的含量測定[2,3]

   2.2.1  對照品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的沒食子酸對照品10 mg , 置100 ml 棕色容量瓶中, 加水溶解并稀釋到刻度, 搖勻, 精密量取25 ml , 置100 ml 棕色量瓶中,用水稀釋至刻度, 搖勻, 得濃度為0.025 mg·ml- 1 的對照品溶液, 備用。

   2.2.2  供試品溶液的制備精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏 D(g), 置250 ml 容量瓶中, 加水溶解并稀釋至刻度, 搖勻。過濾, 棄去初濾液50 ml , 精密量取100 ml , 置500 ml 棕色容量瓶中, 用水稀釋至刻度, 搖勻,得 E(mg·ml- 1)的供試品溶液Ⅰ; 精密吸取供試品溶液Ⅰ100 ml , 加至已盛有2.4 g 干酪素的500 ml 具塞錐形瓶中, 密塞, 置30 ℃水浴中保溫1 h , 時時振搖, 取出,放冷, 搖勻, 濾過, 棄去初濾液, 續濾液作為供試品溶液Ⅱ, 備用。

   2.2.3  測定波長的選擇沒食子酸對照品溶液和供試品溶液經磷鉬鎢酸-碳酸鈉顯色后, 在紫外可見分光光度計上,波長400~1 000 nm 區間掃描。均在754 nm 處有最大吸收,因此選擇754 nm 為測定波長, 測得的結果以沒食子酸為基準計算總酚和鞣質的含量。

   2.2.4  線性關系考察精確吸取沒食子酸標準溶液0 ,0.5,1.0,1.5,2.0 和2.5 ml 分別置10 ml 棕色容量瓶中, 各加水至5 ml , 再分別加入磷鉬鎢酸試液1 ml , 用29% Na2CO3 溶液稀釋至刻度, 搖勻, 以相應的試劑為空白, 30 min 后, 在754 nm 波長下測定吸光度A。以吸光度A為縱坐標, 體積V(ml) 為橫坐標, 繪制標準曲線。得到回歸方程A=0.353 2V-0.029 2(R2=0.999 1)。

2.2.5  重復性實驗精確吸取F(ml)的供試品溶液Ⅰ和Ⅱ,分別置于10 ml 的棕色容量瓶中, 照標準曲線項下的方法操作, 同法測定吸收值, 各平行測定5 次, 在754 nm 處測定吸光度A, 代入回歸方程, 計算總酚和鞣質的含量。D,E,F的數據見表3。結果見表4。

   2.3  總黃酮的含量測定[4,5]

   2.3.1  方法一對照品溶液和供試品溶液經NaNO2-AlCl3顯色后在紫外可見分光光度計上以400 nm為測定波長進行測定。

   對照品溶液的制備:精確稱取干燥至恒重的對照品20 mg,置100 ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀釋到刻度,搖勻,得濃度為0.2 mg/ml的對照品溶液,備用。

   供試品溶液的制備:精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏 G(g), 置100 ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 得 H(mg·ml- 1)的溶液, 備用。表3  金花茶總酚和鞣質的實驗數據表4  總酚和鞣質含量測定結果測定波長的選擇:對照品溶液和供試品溶液NaNO2- AlCl3 顯色后, 在紫外可見分光光度上, 波長200~600 nm 區間掃描。均在400 nm 處有最大吸收, 因此選擇400 nm 為測定波長。測得的結果以對照品為基準計算總黃酮的含量。

   線性關系考察:精密吸取對照品溶液 0.00,0.30,0.60,0.90,1.20,1.50 ml,各加甲醇至4.0 ml,再分別加入質量分數為5%的NaNO2溶液0.3 ml,搖勻,室溫放置6 min,再加10% AlCl3溶液0.3 ml,搖勻,室溫放置10 min,在400 nm波長下測定吸光度A,同時以試劑空白做參比。以吸光度A為縱坐標,濃度C(mg/ml)為橫坐標,繪制標準曲線。得到回歸方程A=15.065C+0.002 6,R2=0.999 9 線性范圍:0.013~0.065 2 mg/ml。

   重復性實驗:精確吸取 I(ml) 的供試品溶液, 置于試管中, 加入甲醇至4.0 ml , 按照標準曲線項下的方法操作, 測定吸光度, 平行做5次實驗, 代入回歸方程, 計算總黃酮的含量。G 、H 、I的數據見表5。結果見表6。表5  金花茶總黃酮的實驗數據表6  總黃酮含量測定結果

   2.3.2  方法二蘆丁對照品溶液和供試品溶液經NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色后,在紫外可見分光光度計上,以500 nm為測定波長進行測定。

   對照品溶液的制備:精確稱取干燥至恒重的蘆丁對照品20 mg, 置100 ml 容量瓶中, 加入甲醇溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 得濃度為0.2 mg·ml- 1 的對照品溶液, 備用。

   供試品溶液的制備:精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏J(g), 置100 ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀釋至刻度, 搖勻, 得K(mg·ml- 1)的溶液, 備用。

   測定波長的選擇:蘆丁對照品溶液和供試品溶液NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 顯色后, 在紫外可見分光光度上, 波長200~600 nm 區間掃描。均在500 nm 處有最大吸收, 因此選擇500 nm 為測定波長。測得的結果以蘆丁為基準計算總黃酮的含量。

   線性關系考察:精確吸取蘆丁對照品溶液0,0.3,0.6,0.9,1.2和1.5 ml 分置于試管中, 各加甲醇至2.0 ml , 再分別加入質量分數為5%的NaNO2 溶液0.25,搖勻, 室溫放置5 min再加10% Al(NO3)3 溶液0.25 ml , 搖勻, 室溫放置5 min , 再加質量分數為4 %的NaOH 2.0 ml , 搖勻, 室溫放置15 min, 在500 nm 波長下測定吸光度A, 同時以試劑空白做參比。以吸光度A為縱坐標,體積V(ml) 為橫坐標, 繪制標準曲線。得到回歸方程A=0.552 7V-0.010 8(R2=0.999 9)。

   重復性實驗:精確吸取1.0 ml 的供試品溶液, 置于試管中, 加入甲醇至2.0 ml , 按照標準曲線項下的方法操作,測定吸光度, 平行做5次實驗, 代入回歸方程, 計算總黃酮的含量。J,K,L的數據見表7。結果見表8。表7  金花茶總黃酮的實驗數據表8  總黃酮含量測定結果%

   3  討論

   3.1  總黃酮含量測定方法的選擇經大量的文獻調研表明,采用可見分光光度法測定總黃酮的含量是比較成熟的方法,此方法穩定性好,準確度高,且簡便快捷,易于操作,結果可靠,故選擇了采用分光光度法測定金花茶提取物中總黃酮的含量。

   3.2  皂苷含量測定方法的選擇皂苷的分析測定有多種方法,如沉淀法、溶血指數法、層析法等,沉淀法測定往往易帶進雜質或導致皂苷變質;層析法一般可以分離出總皂苷,但對總含量測定不適,誤差大,成本高,而分光光度法操作簡便、靈敏,屬于經典、成熟的方法,我們選擇了與金花茶皂苷類成分基本母核結構接近的齊墩果酸為對照品,采用分光光度法測定其總皂苷的含量。

   3.3  鞣質測定方法的選擇鞣質的經典含量測定方法有很多種,如重量法、容量法、比色法等。以前最常用的有皮粉法、高錳酸鉀法、絡合定量法。2005年版以前的《中國藥典》Ⅰ部[2]鞣質含量測定法一直沿用皮粉法。但是其缺點是耗用樣品多,測定時間長,且沒有選擇性,測定結果偏高,而且皮粉用量很大,而2005年版《中國藥典》Ⅰ部鞣質測定法,以沒食子酸為對照品穩定性好,干酪素的吸附作用具有專屬性,其方法操作簡便,用時短,且重復性和回收率都較理想。

參考文獻】
 [1] 高聲傳,郭 濤,夏維杰,等.比色法測定酸棗仁提取物中總皂苷的含量[J].實用藥物與臨床,2005,8(1):15.

[2] 國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部[S].北京:化學工業出版社,2005:附錄57,附錄63.

[3] 王 坤,魯 靜.中藥材中鞣質含量測定方法的研究[J].中國藥事,2004,18(6):361.

[4] 歐敏銳,許小平,鄧燚杰,等.福建產白花蛇舌草活性成分提取與含量測定[J].海峽藥學,2004,16(2):44.

[5] 畢和平,韓日長,廖家旺,等.穿心蓮總黃酮含量的測定 [J].光譜實驗室,2006,23(3):356.


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